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HPLC法測定復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量

發布時間:2020-01-02所屬分類:醫學論文瀏覽:1

摘要:目的:建立HPLC法同時測定復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量。方法:采用Agilent5TC-C18色譜柱(4.6mm250mm,5m),以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動相,流速為1.0mL/min,檢測波長294nm,檢測柱溫30℃。結果:和厚樸酚、厚樸酚的進樣濃度分別

  摘要:目的:建立HPLC法同時測定復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量。方法:采用Agilent5TC-C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動相,流速為1.0mL/min,檢測波長294nm,檢測柱溫30℃。結果:和厚樸酚、厚樸酚的進樣濃度分別在13.00~208.00g/L(r=0.99995)和26.23~419.68g/L(r=0.99996)呈良好線性關系;和厚樸酚、厚樸酚的平均回收率(n=6)分別為98.58%(RSD%=2.29)、101.29%(RSD%=1.75);5個批次復方藿香丸樣品中和厚樸酚、厚樸酚的含量測定結果分別為3.41~12.26mg/袋、8.59~14.42mg/袋。結論:建立的HPLC法可用于復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量測定。

HPLC 法測定復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚的含量

  關鍵詞:復方藿香丸;厚樸酚;和厚樸酚;含量測定

  復方藿香丸為萍鄉市中醫院的醫院制劑,由廣藿香、厚樸(姜制)、陳皮、紫蘇葉、白芷、白術(炒)、姜半夏、茯苓、桔梗、甘草、大腹皮、生姜、大棗等13味中藥組成,具有解表化濕,理氣和中之功效,主要用于外感風寒,內傷濕滯,頭痛昏重,脘腹脹痛,嘔吐泄瀉,胃腸型感冒。厚樸是臨床常用中藥,來源于木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.etWils.或凹葉厚樸MagnoliaoffinalisRehd.etWils.var.bilobaRehd.etWils.的干燥干皮、根皮及枝皮,具燥濕消痰,下氣除滿之功效[1]。處方中厚樸作為臣藥,加強君藥廣藿香解表化濕的功效。其主要有效成分為和厚樸酚、厚樸酚[2-5]。研究表明,厚樸酚與和厚樸酚均有抗腹瀉作用[6-7]。目前復方藿香丸收錄于2007年版《江西省食品藥品監督管理局醫療機構制劑標準》,主要質控項目僅為“性狀”“薄層鑒別”兩個項目,尚未有復方藿香丸中活性成分的含量測定方法。隨著國家對醫院制劑標準的提高和規范化管理的加強[8],為了更全面的對復方藿香丸進行質量控制,因此本文建立了復方藿香丸中厚樸的HPLC含量測定方法,以厚樸酚與和厚樸酚為指標性成分,以期為控制和提高復方藿香丸的質量提供科學依據。

  1材料

  1.1試藥復方藿香丸(規格每袋9克)均由萍鄉市中醫院提供;厚樸酚(98.8%,批號110729-201513)、和厚樸酚(100%,批號110730-201614)對照品購于中國食品藥品檢定研究院;甲醇、乙腈(HPLC級,購于北京百靈威科技有限公司);水為娃哈哈水,其他試劑均為分析純。

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  1.2儀器Agilent1200高效液相色譜儀,包括Agilent1200柱溫箱、DAD檢測器、Agilent1200色譜工作站。ME-204(萬分之一天平,梅特勒-托利多國際貿易(上海)有限公司);電子分析天平CP225D(十萬分之一,德國Satorius科學儀器有限公司);酸度計(德國Satorius科學儀器有限公司)。

  2方法與結果

  2.1溶液制備

  2.1.1混合對照品儲備液的制備分別精密稱取和厚樸酚、厚樸酚對照品適量,置同一25mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,即得含和厚樸酚520.00g/L、厚樸酚1049.20g/L的混合儲備溶液。

  2.1.2供試品溶液的制備取裝量差異項下內容物,研細,取約2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇溶液25mL,稱定重量,超聲(500W,40KHz)處理30min,放冷,再稱定重量,用甲醇溶液補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液,即得。

  2.1.3陰性樣品溶液的制備按工藝方法制備缺少厚樸的陰性樣品,按“2.1.2”項下方法操作,制成陰性樣品溶液,依法測定,結果表明:陰性樣品的HPLC圖譜中,無呈現與厚樸酚、和厚樸酚對照品保留時間相同的色譜峰,見圖1。

  2.2色譜條件色譜柱為Agilent5TC-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動相,檢測流速為1.0mL/min,波長294nm,柱溫30℃,進樣量10μL,在上述色譜條件下,和厚樸酚、厚樸酚與其他組分的色譜峰分離度良好。對照品、樣品及陰性樣品色譜圖見圖1。

  2.3方法學考察

  2.3.1線性關系考察精密吸取上述混合對照品儲備液,加甲醇逐級稀釋得系列標準溶液,含厚樸酚分別為26.23,52.46,104.92,209.84,419.68g/L;含和厚樸酚分別為13.00,26.00,52.00,104.00,208.00g/L。分別精密吸取上述對照品溶液各10μL注入液相色譜儀,按“2.2”項下色譜條件測定,以對照品的進樣濃度(g/L)為橫坐標(X),峰面積積分值為縱坐標(Y),繪制標準曲線,得厚樸酚回歸方程:Y=13.94014X+6.27638,r=0.99996;和厚樸酚回歸方程:Y=15.32088X+3.53886,r=0.99995。結果表明厚樸酚進樣濃度在26.23~419.68g/L呈良好線性關系;和厚樸酚進樣濃度在13.00~208.00g/L呈良好線性關系。

  2.3.2精密度試驗精密吸取混合對照品溶液(和厚樸酚52.00g/L、厚樸酚104.92g/L)10μL,按“2.2”項下色譜條件連續進樣6次,測定峰面積。和厚樸酚峰面積的RSD為0.52%;厚樸酚峰面積的RSD為0.43%。結果表明精密度良好。

  2.3.3穩定性實驗取同一份供試品溶液,分別于制備后0、2、4、6、8、10、12h精密吸取10μL進樣,按“2.2”項下色譜條件,測定厚樸酚與和厚樸酚的峰面積,測得和厚樸酚峰面積的RSD為0.92%;厚樸酚峰面積的RSD為0.77%。結果表明供試品溶液在室溫下12h內穩定。

  2.3.4重復性試驗取同一批號(20150402)樣品六份,按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液,按“2.2”項下色譜條件進樣測定,計算和厚樸酚與厚樸酚的含量(mg/袋)。結果計算得和厚樸酚含量的RSD為1.82%;厚樸酚含量的RSD為0.84%;表明該方法重現性良好。

  2.3.5加樣回收率試驗取已知含量(和厚樸酚:7.1565mg/袋;厚樸酚:14.4420mg/袋)的復方藿香丸樣品,研細,取約1g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別加入適量和厚樸酚與厚樸酚混合對照儲備液,按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液,按“2.2”項下色譜條件測定含量,計算加樣回收率(n=6),結果表明和厚樸酚與厚樸酚的平均回收率分別為98.58%、101.29%,RSD分別為2.29%、1.75%,結果見表1-2。

  2.3.6耐用性試驗取同一批號(20170705)樣品,按“2.3”項下方法制備供試品溶液,分別采用Agilent5TC-C18(4.6mm×250mm,5μm)、SepaxAmethystC18-H(4.6mm×250mm,5μm)、WelchUltimateXB-C18(4.6mm×250mm,5μm)3種品牌的色譜柱,按“2.2”項下色譜條件測定,結果無明顯差別。

  2.4樣品測定取不同批號復方藿香丸樣品,按“2.1.2”項下供試品溶液的制備項下制備供試液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL注入液相色譜儀,測定,即得。結果見表3。

  3討論

  3.1色譜條件的選擇經DAD檢測器掃描和厚樸酚、厚樸酚對照品,結果顯示和厚樸酚的最大吸收波長為294nm,厚樸酚的最大吸收波長為292nm,綜合考慮選擇294m作為檢測波長。在流動相的選擇中,由于復方藿香丸中含十三味中藥,成分復雜,本文嘗試參考《中國藥典》2015年版一部厚樸含量測定項下流動相甲醇-水(78∶22),結果和厚樸酚的分離度達不到要求。后嘗試乙腈-水(40∶60)、乙腈-0.1%磷酸(45∶55),結果顯示和厚樸酚的分離度均達不到要求。而甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)系統分離效果好,峰形最佳,故選擇甲醇-乙腈-0.3%磷酸(44∶19∶37)為流動相。

  3.2提取方法及時間的考察提取條件采用超聲提取法分別考察了甲醇、50%甲醇、稀乙醇三種提取溶劑,結果表明甲醇提取效率最高。在此基礎上,分別考察了超聲和回流2種提取方式,結果超聲與回流提取效率相當,故選用提取簡單的超聲提取方式。同時對甲醇溶液用量10、25、50mL,以及超聲時間15、30,60min進行考察,最后確定采用甲醇超聲(500W,40KHz)處理30min為宜。

  3.3小結

  從對5批復方藿香丸樣品中和厚樸酚與厚樸酚的含量測定結果來看,和厚樸酚與厚樸酚含量相差較大,提示厚樸原藥材的質量存在差別,為避免由原藥材引起中成藥的療效差異,保障人民用藥的安全有效,因此有必要對厚樸進行質量控制。本文建立了同時測定復方藿香丸中和厚樸酚與厚樸酚含量的HPLC方法,經方法學驗證,該方法準確、快速,操作簡便,專屬性強,重現性好,可用于復方藿香丸的質量評價。

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